细胞学堂 | RPMI8226培养易被忽视的问题

RPMI8226是1966年从一名61岁男性浆细胞瘤患者的外周血中分离出的B淋巴细胞，它们可用于免疫学和免疫系统疾病的研究。该细胞系是合适的转染宿主。

基础信息

形态特征

与其他由外周血白细胞发展而来的细胞系相似，该细胞亦表现出淋巴母细胞形态特征。该细胞系未见典型的成熟浆细胞，但有未成熟浆细胞，胞浆染色较深。扫描电镜照片显示，几乎所有细胞内部都有一层围绕细胞排列的肿胀的内质网。这在其他细胞系中未曾出现，这些结构特征类似于发展中的浆细胞。该细胞培养物中未发现白细胞病毒。

基因表达

该细胞仅表达游离形式的人类免疫球蛋白λ型轻链。

特点

目前，学界暂没有证据表明，RPMI8226细胞能产生重链(细胞质型或分泌型)。

病毒易感性

人脊髓灰质炎病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒、水泡性口炎病毒等，都是RPMI8226细胞容易感染的。

细胞培养

1、细胞培养条件

RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)。

2、生长特性

细胞主要以悬浮的单细胞形式生长，部分细胞可能贴壁生长（有时可达50%）；

细胞大小不均一。

3、倍增时间

60小时(PubMed=25984343); 33.5小时(NCI-DTP); 60-70小时 (DSMZ)。

4、传代方式

建议传代密度为3-5×10^5个活细胞/mL；生长密度不超过2-3×10^6个活细胞/mL。

可通过补液、离心或更换新鲜培养基的形式培养此细胞，细胞传代培养密度控制在5×10^5-2×10^6活细胞/mL为佳。换液频率建议2-3次/周。

5、冻存和复苏

冻存密度：推荐冻存密度1×10^6 个活细胞/mL。

冻存条件：55%基础培养基+40%血清+5%DMSO；液氮保存。

RPMI8226生长图片

注意事项

1、严格控制传代密度，密度过低或者过大都容易造成细胞死亡；

2、密度低的时候，尽量少动少离心，以减少对细胞的伤害；

3、状态不好时可补加2mM谷氨酰胺；

4、在培养过程中会出现细胞碎片过多的情况，可以用低速离心去除，一般为800r/min，（由于低速离心会损失部分细胞，故此操作不适合细胞密度过低时使用）；

5、冻存复苏时保证接种密度，复苏后维持培养环境的稳定，一般24h后再观察细胞状态。

温馨提醒：

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