细胞学堂 | HMC3人小胶质细胞培养从零开始
培养条件
培养液：MEM(含NEAA)＋10% FBS＋1% P/S
二氧化碳培养箱：稳定的温度（37℃），稳定的CO2水平（5%）
生长特性
贴壁，巨噬细胞样
传代比例和频次
推荐1:3~1:5传代，每3~4天传代一次
细胞类型
小胶质细胞
形态学
巨噬细胞
背景介绍
HMC3细胞系，是通过人胎脑源性原代小胶质细胞培养物的 SV40 依赖性永生化建立的，静息 HMC3 细胞的小胶质细胞/巨噬细胞标志物IBA1呈强阳性，星形胶质细胞标志物GFAP呈阴性。
活化小胶质细胞的标志物，即MHCII、CD68 和 CD11b，在静息 HMC3 细胞中呈阴性，但在被 IFN-γ（10ng/mL，24 小时）激活后上调。
具体应用
神经科学，神经炎症
转化的人小胶质细胞代表可以无限生长的同质细胞群，并且可以用于小胶质细胞功能的生化分析的便捷系统。正如实验所证明的，它们还可以进行转染，这对研究小胶质细胞中各种转染基因的表达调控有重要意义。
培养注意事项
1、2-3天换液一次；
2、培养过程中可能会有细胞碎片产生，及时换液除去即可。
传代步骤
1、吸出原培养液；
2、加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；
3、加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶，使之浸润所有细胞；
4、放入培养箱消化，消化2-3分钟，轻拍培养瓶侧壁，显微镜下看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后，可终止；
5、加入3mL含血清的培养基，终止消化，吹打细胞使之脱壁，并在液体里反复吹打，使细胞混匀为悬浮液，这时可以在显微镜观察；
6、收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3分钟，离心完吸出上清丢弃；
7、加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可；按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；
8、检查培养箱二氧化碳、温度和水盘。
换液步骤
1、吸出旧培养基，用PBS进行润洗，然后加入新的培养基；
2、每2~3天换液一次。
冻存步骤
1、配制冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基DM/F12）+40%(血清)+5%（DMSO）；
2、DMSO配制的时候会发热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞；
3、细胞消化下来制成细胞悬液；
4、1200rpm 3分钟离心后去上清，尽量吸干净上清；
5、加入配制好的冻存液重悬，建议一个T25长满，冻存1支，或者细胞计数后，按照3~5×106cells/支冻存；
6、分装好的冻存液转入程序冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；
7、从-80℃冰箱取出冻存管，并迅速转移到液氮长期保存。
复苏步骤
1、将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性PE手套，向一个无菌离心管内加入5mL无菌培养基；
2、将细胞从液氮罐中取出，放入PE手套中，迅速没入水浴锅，摇晃冻存管，使细胞快速溶解，以1分钟内全部溶解为宜；
3、在超净台中，将复苏好的细胞液加入到装有新鲜培养基的离心管内，1200rpm/min离心3分钟，离心完毕去掉上清；
4、取适量专用完全培养基重悬细胞，接入到无菌容器中（培养瓶或培养皿），补充培养基到适宜，放入培养箱培养；
5、溶解过程要快，已溶解的冻存细胞在常温中尽量短时间存放，尽快离心去除DMSO。
图1. HMC3细胞正常生长
参考文献
[1] Nakagawa Y, Chiba K. Diversity and plasticity of microglial cells in psychiatric and neurological disorders. Pharmacol Thera 154: 21–35, 2015. PubMed: 26129625
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[5] Dello Russo C, et al. The human microglial HMC3 cell line: where do we stand? A systematic literature review. J Neuroinflammation 15(1):259, 2018. PubMed: 30200996
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