细胞学堂 | 培养K7M2-WT细胞，千万不要错过这些知识

K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨细胞)在Balb/c小鼠中形成肿瘤，在超过90%的接种小鼠中自发转移到肺部。K7M2-WT细胞抗原表达：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、饰胶蛋白聚糖、绒毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素的表达显示K7M2-WT细胞骨家族细胞特性。

基础信息

细胞复苏

1、将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性手套，将细胞从液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速没入水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以一分钟内全部溶解为宜；

2、将解冻的细胞放入装有新鲜培养基的离心管中，打开盖子前，用75%酒精擦拭冻存管外部；

3、1200rpm离心3分钟左右，离心完毕后去掉上清；

4、取适量与细胞配套的完全培养基重悬细胞，并接入到无菌容器中，补充一定量培养基，再放入培养箱培养。

细胞冻存

1、配置冻存液。由于DMSO配置时会发热，一定要等冻存液冷却后再使用，避免灼伤细胞；

2、细胞消化好后用新鲜培养基终止，制成细胞悬液，1200rpm离心3分钟左右，尽量吸尽上清；

3、加入配置好的冻存液，调节浓度至大约1×106个细胞/mL，分装到细胞冻存管；

4、分装好的冻存液转入程序冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；

5、从-80℃冰箱取出冻存管，并迅速转移到液氮长期保存。

细胞传代

1、将培养基吸出丢弃，加入2mL PBS润洗；

2、吸出PBS丢弃，加入2mL胰酶润洗；

3、放入培养箱消化2-3分钟，轻拍培养皿侧壁，看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后，加入2mL完全培养基终止消化；

4、将细胞轻柔吹打，使细胞混匀为悬浮液，根据需求进行接种。

小贴士

细胞密度不能太低；

润洗时要注意将所有细胞都浸润到。

图1. K7M2-WT细胞正常生长

培养注意事项

1、该细胞对外界刺激较为敏感，建议使用新鲜的DMEM高糖培养基，培养基出现发紫现象时不建议继续使用，且及时更换新鲜培养基；

2、该细胞贴壁不牢，会有部分细胞悬浮。换液时勿用PBS进行冲洗，悬浮细胞过多时可离心收集再放回原培养瓶；

3、该细胞传代时请注意消化程度，请勿消化过度。

温馨提醒：

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