细胞学堂 | 最常见的黑点污染：支原体和“黑胶虫”

细胞污染是细胞培养中最常见、最棘手的问题，在发现细胞形态异常时，一定要及时排查污染并进行处理，否则会给我们的实验造成极大的影响。

在各种污染类型中，小普发现最为大家困扰的污染就是“黑点”，所以本期细胞学堂将为大家介绍细胞出现黑点时可能的污染类型：支原体污染和“黑胶虫”污染。

支原体污染

支原体污染几乎可影响所有细胞生长参数、代谢及研究的任一数据，并且，支原体缺乏细胞壁，所以常规的抗生素并不能对它们起到抵抗作用，而且由于其直径太小，滤菌器也无法过滤。

图1. 支原体污染

支原体污染常见表现：

1、细胞状态变差、生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不浑浊；

2、细胞传代以后就出现细胞间黑点、细胞空泡化或者很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。

“黑胶虫”污染

“黑胶虫”及其分解复合物是一种常见的细胞污染物，与细胞共生，随细胞传代而传代，通常抗生素对其无效。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡。

图2. “黑胶虫”污染

“黑胶虫”污染常见表现：

ⵘ 培养液不浑浊，但在显微镜下观察细胞时，细胞周围和培养液中有很多“小黑点”，且随着培养时间的延长，“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除；

ⵘ 细胞营养消耗快，需要频繁更换培养液；

ⵘ 细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能出现细胞形态的改变。

处理方法

若细胞状态太差，建议最好直接丢弃，另外对培养箱做由里至外的清洁处理；

若细胞状态尚可，那么在确定对细胞的基因及蛋白表达没有影响的情况下，可以对应使用支原体清除试剂或“黑胶虫”清除试剂，培养2-3代可转阴。

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使用普诺赛支原体清除试剂，3天之后即可见明显清除效果；处理 15 天后，可以用支原体检测试剂盒进行检测，检测支原体是否杀灭完全；如果仍有支原体残留，可以考虑再处理 6 天。

使用普诺赛“黑胶虫”清除试剂，3天之后，即可见明显清楚效果；连续使用12-14天即可将“黑胶虫”清除，若“黑胶虫”污染较为严重，可延长处理3-5天。