细胞学堂|MEG-01培养注意事项

基本信息

1、细胞名称

MEG-01 (人成巨核细胞白血病细胞）

2、别名

Meg-01; MEG01; Meg01

3、细胞培养条件

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S，37℃；5% CO2

4、生长特性

半贴半悬 

5、细胞形态

淋巴母细胞样

背景资料

MEG-01是一种巨核母细胞系，该细胞来自于一名费城染色体(Ph)阳性的慢性粒细胞性白血病（CML）患者。1983年由Michinori Ogura, Yasuo Morishima等人从一名55岁患有慢性粒细胞性白血病（CML）且处于CML爆发危机的男性的骨髓样本中提取。

MEG-01细胞没悬浮的细胞大多为圆形或者卵圆形，贴壁的细胞会伸出伪足。细胞质相对嗜碱性，并含有少量空泡，还观察到细胞质突起。单克隆抗体的间接免疫荧光试验显示，MEG-01细胞表面的FVIII相关抗原呈阴性，该抗原在MEG-01细胞特别是大细胞的细胞质中呈阳性。所有细胞均呈弥漫性和细颗粒状的酸性磷酸酶强阳性。

MEG-01不仅为研究人类巨核细胞分化和成熟提供研究模型，而且为血小板或蛋白质如FVIII相关抗原、血小板糖蛋白或血小板衍生生长因子（PDGF）等的产生和释放提供一种有用的研究模型。

细胞特性

培养中始终存在一些黑点样碎片，不需要特殊处理。大部分细胞呈不规则圆形悬浮状态，有少量细胞呈梭形贴壁。

培养方法

以T25瓶为例

1、该细胞为半贴壁半悬浮细胞，其中贴壁细胞较少或到50%均为正常，可以按悬浮细胞的培养方式传代，贴壁部分吹下即可（如遇吹不下来，可用0.25%胰酶适当消化）；

2、维持细胞密度在3-10×105cells/mL培养，初始接种密度不低于3×105cells/mL，长到10×105cells/mL左右进行传代。建议前期计数后操作，后面可以根据经验传代；

3、每隔3天计数操作一次，如密度低于3×105cells/mL可更换小体积容器（如孔板）进行培养；

4、根据细胞密度选择其中一种操作方法：

方法一

半换液。如密度不足8×105cells/mL则进行半换液；缓缓吸出上层一半的培养液，于1200 rpm（250g左右） 3min离心收集细胞，加入等体积新鲜培养基重悬细胞，轻轻吹打3-5次，接回原瓶继续培养；

方法二

1：2稀释传代。如密度接近10×105cells/mL左右，则将细胞等体积分装到两个新培养瓶，每瓶分别补加新鲜培养基到总体积5mL；

方法三

全离心换液或传代。细胞每持续培养超一周可进行一次全离心换液或者传代，不建议频繁用离心的方式换液或传代；离心转速推荐1200rpm 3min。

特殊注意事项

1、该细胞增殖较慢，比较脆弱，培养中减少观察挪动，维持稳定的培养温度和环境；

2、尽可能减少吹打次数，取样计数或者传代时轻轻吹打3-5下混匀细胞即可；

3、传代后每天观察细胞状态，如果密度太大，不及时处理，细胞容易死亡，需严格控制培养密度；

4、至少每3天需要将细胞半换液或者传代一次，一周左右全部离心换液一次。

冻存与复苏

推荐冻存密度：

3~5×106 cells/mL ；

冻存液配比：

55% RPMI-1640 +40% FBS+5%DMSO，需使用程序冻存盒梯度降温冻存。

生长图片

图1：建系文档中的MEG-01细胞图

图2：ATCC培养图，来源于ATCC

图3：普诺赛培养图

细胞背景资料详细信息 

https://www.atcc.org/products/crl-2021

参考文献：

[1] Ogura M, et al. Establishment of a novel human megakaryoblastic leukemia cell line, MEG- 01, with positive Philadelphia chromosome. Blood 66: 1384-1392, 1985. PubMed: 2998511